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技术文章:生物指示剂芽孢浓度测定试验

2017-01-18

随着质量风险控制理念的深入,灭菌工艺研究在我国医药领域中日益受到重视。生物指示剂可以对灭菌工艺进行设定、确认和监测。评估生物指示剂的两个主要指标分别是孢子数和D值。活孢子总数测试是生物指示剂用户在进货检验时的一种常见的测试。 

1试验原理

休眠期的芽孢如果受到外在的诱导,比如受到热刺激,会从休眠状态复苏,有利于检测。用活细胞计数法对激活为生长状态的芽孢杆菌进行计数,最常用的是平板菌落计数法,是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。

2 试验方法

取出菌片:将生物指示剂的菌片、芽孢条、不休钢片等带菌载体从生物指示剂的外包装中取出,装入内置玻璃珠的装有无菌水的平底试管中。如果是SterilAmp IISterilAmp II “5230”MagnaAmp生物指示剂,随机选择4个安剖瓶放入高硼硅瓶,使用无菌不锈钢棒或无菌镊子将安剖瓶敲碎,用无菌纯化水冲洗破碎装置,流入高硼硅瓶,补充一定量无菌水,转移一定量菌液至平底试管中。

超声处理:将装有生物指示剂的试管进行超声处理。超声清洗仪的频率45-60kHz。注意Apex 生物指示剂的超声不少于15分钟。

系列稀释:取一定体积的菌悬液,作一系列的倍比稀释。注意每次稀释时需先涡旋,涡旋后应立即进行转移。

热击处理:根据受试微生物种类(见表1)在热水浴中对每个试管进行热 击,将样品插入到热水浴中时立即开始计时。热击后取出试管,并在冰浴中迅速冷却。

涂板培养:0.1 mL菌液转移至胰酪蛋白胨琼脂培养基中(采用浇注法或涂布法两种不同平皿计数方式),按照表1中的培养条件进行培养,培养完成后进行菌落计数。

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