阳性生物指示剂的培养与鉴定
2020-09-03
当在灭菌周期中发现阳性生物指示剂（BI）时，ISO和USP建议鉴定造成阳性结果的微生物，这样可以将调查重点放在正确的方向上：如果该阳性微生物被鉴定为BI中的微生物，则调查重点应集中在灭菌过程上，包括但不限于灭菌循环本身、灭菌器、物理监控器和装载。如果该阳性微生物未被鉴定为BI中的微生物，则阳性结果的原因很有可能是灭菌后的操作污染，因此调查重点应集中在灭菌后BI的处理上。
The identification of growth as that of the test organism should be confirmed …
Characterization of Biological Indicators – Identification
Where identification of the BI species is deemed necessary, as in the course of an investigation into unusual results, use either a phenotypic or genotypic identification method …
生物指示剂特征–鉴定
如果认为需要鉴定BI微生物，例如在异常结果调查的过程中，请使用表型或基因型鉴定方法…
Mesa Labs建议在整个培养过程中经常读取BI结果。该建议有两个原因。第一，这将允许工厂对BI阳性结果尽快做出响应。第二，当BI呈阳性时，必须立即开始鉴定过程，否则可能无法获得鉴定所需的活的营养细胞。
BI是接种有可形成细菌的孢子的测试系统。孢子是细菌的休眠形式，在培养过程中，在提供营养源、生长培养基和正确的生长温度之前，它将一直保持休眠状态。在这些有利条件下，孢子将萌发成具有代谢活性的营养细胞，这些细胞开始增殖，同时在生长培养基中代谢碳水化合物。碳水化合物代谢的结果是酸性副产物，其降低了生长培养基的pH。如果培养基中含有pH指示剂，例如溴甲酚紫或酚红，则酸性副产物导致的pH降低会导致培养基从紫色或红色变为黄色。在不含有pH指示剂的培养基中，也是同样的机制，但不能观察到颜色变化，而是混浊。酸性副产物对营养细胞具有杀伤性，如果细胞在不利的环境中放置太长时间，所有细胞将死亡，无法获得用于微生物鉴定的细胞。
以下是推荐用于培养Mesa 阳性BI的分步过程。所有操作应在超净工作台或生物安全柜中进行，以免造成污染，而污染可能造成对导致阳性结果的微生物做出错误的鉴定。
• 对于在带有生长培养基的试管中培养的BI，请以无菌方式取下盖子打开试管。
•对于液体BI，ProSpore，MagnaAmpTM和SterilAmp®，请用异丙醇消毒安瓿瓶的外部并使其干燥。将安瓿瓶放在无菌的Pyrex瓶中，并用无菌的不锈钢棒或无菌的镊子将其压碎（为安全起见，应戴上安全镜）。
产品灭菌不合格是一个非常严重的质量问题，找出原因并采取预防措施对保证灭菌质量非常重要。我们在日常灭菌监控时会发现，即使经过根据过度杀灭原理确定的灭菌工艺，有时灭菌后的生物指示剂仍然会出现一个或几个呈阳性的情况。当遇到生物指示剂呈阳性的情况时，不要急于确定是灭菌过程不合格，也不要认为是生物指示剂不合格。生物指示剂呈阳性的原因，包括：（1）生物指示剂的质量问题；（2）微生物试验过程中出现的问题；（3）被灭菌产品改变产生的问题；（4）灭菌过程中产生的问题，所以需要对阳性生物指示剂中的微生物进行培养与鉴定，才能确定是哪个原因，本文提供了一些对阳性生物指示剂中微生物进行培养与鉴定的相关法规和试验细节，希望对大家有所帮助。
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