在制药、医疗器械及食品工业中，灭菌是保障产品安全的核心环节。而生物指示剂作为验证灭菌效果的“金标准”，其正确选用直接关系到无菌保证水平（SAL）的可靠性。不同灭菌工艺的物理机制迥异，对生物指示剂的菌种、载体和抗力要求也截然不同。本文将结合2020年版《中国药典》及相关标准，系统阐述湿热、干热及过氧化氢三种主流灭菌方式下生物指示剂的选用原则。

湿热灭菌：嗜热脂肪地芽孢杆菌的“主场”

湿热灭菌因蒸汽穿透力强、灭活效率高而应用最广。嗜热脂肪地芽孢杆菌是该工艺最经典、最通用的生物指示剂。在121℃饱和蒸汽条件下，其D值（杀灭90%微生物所需时间）通常要求不低于1.5分钟，结合10^6 CFU/片的芽孢载量，理论上12分钟即可达到12-log的杀灭率，为无菌保证提供了充分的安全边际。

但在实际选型时，需注意两点差异：

 1.针对热不稳定物品：若灭菌程序F0值小于12（如115℃×30min），传统嗜热脂肪地芽孢杆菌可能过于严苛。此时可选择生孢梭菌、枯草芽孢杆菌或凝结芽孢杆菌等耐受性更低的指示剂。

图示	品牌	货号	使用场景	芽孢
	Terragene	BT24/6	液体负载115℃湿热BI	Bacillus subtilis 35021 枯草5230
	True Indicating	SB5-06	非液体115E负载湿热BI	Bacillus subtilis 35021 枯草5230

2.根据被灭菌物形态：液体（如培养基、注射剂）建议使用悬液式生物指示剂，以模拟液体内部的热穿透状态；固体表面或织物则适合片式或自含式生物指示剂。

图示	品牌	货号	使用场景	芽孢
	Terragene	BT24/6	液体负载121℃湿热BI	G.stearothermophilus 7953 嗜热脂肪地芽孢杆菌
	Terragene	SB5-06	非液体121℃负载湿热BI	G.stearothermophilus 7953 嗜热脂肪地芽孢杆菌

干热灭菌：萎缩芽孢杆菌与去热原的更高挑战

干热灭菌依靠高温干热空气氧化微生物，温度范围通常在120℃~180℃。其常用生物指示剂为萎缩芽孢杆菌（ATCC 9372）。该菌种对干热环境的抗性远高于湿热，能有效验证干热灭菌器的性能。

需特别强调的是，干热灭菌常用于去除热原（内毒素） 。由于去热原所需的温度（通常≥250℃）远高于杀灭芽孢的温度，若工艺以去热原为目的，则生物指示剂验证并非充分条件，必须同时通过内毒素挑战试验来验证。

图示	品牌	货号	使用场景	芽孢
	Terragene	BT31	去热原所需的温度（通常≥250℃）	B. atrophaeus 9372 萎缩芽孢杆菌
	Terragene	BT40/6	温度范围通常在120℃~180℃	B. atrophaeus 9372 萎缩芽孢杆菌

过氧化氢灭菌：嗜热脂肪地芽孢杆菌为主，载体选择是关键

汽化过氧化氢灭菌因低温、无残留的优势，在隔离器和洁净室中被广泛采用。其推荐生物指示剂与湿热灭菌相同——嗜热脂肪地芽孢杆菌（部分工艺也使用萎缩芽孢杆菌）。

然而，VHP灭菌的选型存在三大特殊雷区：

 1.无统一D值标准：与湿热灭菌不同，由于VHP系统存在“干”、“湿”、“微冷凝”等多种技术路线，气相和液相的杀菌效力差异巨大，现行药典和ISO标准并未给出VHP生物指示剂的推荐D值范围，用户需根据自家设备工艺的实际抗力进行匹配。

 2.严格限制载体材质：严禁使用纸、布等纤维或高吸附性材料作为载体，因为它们会吸收过氧化氢，干扰气体浓度并导致假阴性。必须选择玻璃、金属或塑料等不透气载体。

 3.菌株适用性差异：即使同为嗜热脂肪地芽孢杆菌，专用于VHP的菌株（如ATCC 12980）与用于湿热灭菌的菌株（如ATCC 7953）在抗力上存在显著差异，不可混用。

图示	品牌	货号	使用场景	芽孢
	Great Divide Labs	JRS-024	汽化过氧化氢灭菌过程	G. stearothermophilus 12980 嗜热脂肪地芽孢杆菌
	Terragene	BT91	等离子体或汽化过氧化氢灭菌过程	G. stearothermophilus 12980 嗜热脂肪地芽孢杆菌

结语

生物指示剂的选用绝非“一刀切”。湿热灭菌首选嗜热脂肪地芽孢杆菌，视F0值调整菌株；干热灭菌主用萎缩芽孢杆菌，需配合内毒素检测；过氧化氢灭菌虽同用嗜热脂肪地芽孢杆菌，但必须关注工艺匹配性与载体材质。只有深刻理解不同灭菌方式的物理化学本质，结合药典要求与工艺参数，才能实现科学、有效的灭菌验证。