菌株身份与分类沿革

ATCC 16404 是微生物质控领域使用最为广泛的丝状真菌参考菌株之一。该菌株最初以黑曲霉（Aspergillus niger） 的名义保藏在ATCC，2007年经Varga等人多相分类学研究后，被重新鉴定并命名为巴西曲霉（Aspergillus brasiliensis）。这一分类变更意味着，在2011年之前发表的文献或产品目录中，ATCC 16404 常以“黑曲霉”出现，两者指向的是同一株菌。

该菌株的分离来源为美国北卡罗来纳州的蓝莓，生物安全等级为BSL-1，属于非模式菌株。其在国际菌种保藏体系中的交叉编号包括 CBS 733.88、DSM 1387、IFO 9455、IMI 149007、NCPF 2275 以及 WDCM 00053。

形态学特征

巴西曲霉 ATCC 16404 在推荐培养基上生长迅速。菌落初期呈白色或淡黄色，菌丝在5至10天内可覆盖培养皿。随着分生孢子成熟，孢子头由浅色逐渐转为深棕色至黑色。菌落背面呈淡色至灰绿色或黄绿色，菌丝中常可见放射状脊纹。

显微镜下，分生孢子头呈放射状，分生孢子为球形，中棕色至深棕色，表面高度粗糙，具有脊状和钝或尖的突起，直径约3–6 μm。产孢在气体交换受限的环境中可能受到抑制，使用新鲜产生的孢子作为接种物可减少菌落分节现象。

药典与标准体系中的应用

ATCC 16404 在多个国际药典和标准中被列为指定测试菌株，核心应用场景包括：

培养基促生长测试：在沙氏葡萄糖琼脂等真菌培养基的促生长能力检查中，该菌株被用于验证培养基支持霉菌生长的能力。中国食品药品检定研究院的对照培养基说明书明确将巴西曲霉 ATCC 16404 列为测试菌株之一。

无菌检查与微生物限度检查：欧洲药典（EP 2.6.1、2.6.12）、日本药典（JP 16 4.05、4.06）、美国药典（USP）相关章节均将其纳入方法验证的测试微生物。

抑菌效力测试：在化妆品、药品防腐体系效力评价中，该菌株作为真菌代表用于挑战测试，评估产品对霉菌的抑制能力。

ISO标准引用：ISO 11133（培养基质量控制）和 ISO 11930（化妆品抗菌保护评价）等标准中，ATCC 16404 被列为参考菌株。

培养条件与操作要点

推荐培养基与温度

ATCC 官方推荐的培养基包括马铃薯葡萄糖琼脂（PDA，ATCC Medium 336）、麦芽浸膏琼脂（ATCC Medium 325） 以及改良沙氏琼脂/肉汤（ATCC Medium 28）。培养温度为20–25°C，好氧条件。

冻干菌株复苏步骤

对于冻干安瓿瓶产品，ATCC推荐的操作流程为：取约0.5–1.0 mL无菌蒸馏水直接加入冻干菌饼，搅拌形成悬液；将悬液转移回剩余无菌水中混匀；室温静置至少2小时（过夜可提高部分真菌的存活率）；混匀后取数滴接种至推荐培养基；在推荐温度下培养，通常2–3天可见活力，但充分生长可能需要更长时间。

孢子收获与浓度调整

在需要制备孢子悬液的实验中（如抑菌效力测试），可使用含0.9% NaCl 和 0.05% Tween 80 的无菌溶液从琼脂表面收获孢子。Tween 80的作用是降低表面张力，防止孢子团聚，保证悬液均匀性。培养条件通常为20–25°C培养7天或直至获得良好产孢。

Microbiologics 即用型衍生形式

除传统的冻干菌株外，Microbiologics 作为 ATCC 授权衍生品生产商，提供多种基于 ATCC 16404 的即用型质控菌株格式，以适应不同实验室的质控场景与合规需求。需注意，该菌株在 Microbiologics 产品目录中的名称为 Aspergillus brasiliensis，源自 ATCC® 16404™，与 ATCC 官方命名一致。

KWIK-STIK™ 系列是 Microbiologics 的经典即用型格式，每支装置内含冻干菌饼、水化液储液槽及接种拭子，激活后即可直接用于接种。ATCC 16404 对应的产品编号为 0392K，以6支/包装供应，从参考菌株的传代次数不超过3代。KWIK-STIK Plus™ 格式则进一步将传代次数控制在2代以内，适用于对溯源性要求更为严格的法规环境。

LYFO DISK™ 格式提供每瓶6片冻干菌饼，使用时取出一片，用特定体积的无菌水化液（如TSB或BHIB）复水并研磨均匀后即可接种。ATCC 16404 对应的编号为 0392L，传代次数同样不超过3代，2–8°C储存，有效期两年。

Epower™ 系列是定量化的即用型产品，每瓶含10片冻干菌饼，浓度范围覆盖10²至10⁸ CFU/片，适用于方法验证、消毒剂效力测试、生物负载测定等需要精确接种量的场景。ATCC 16404 对应的 Epower 产品编号为 0392E，可根据实验需求选择特定浓度规格。其中 Epower CRM™ 为认证参考物质，从参考菌株仅传1代，附有符合 ISO 17034 要求的证书，标明认证值与不确定度，适用于 ISO 17025 认可实验室的方法验证与能力验证。

0392 系列冻干菌饼是 Microbiologics 的基础即用型产品，ATCC 16404 对应的编号为 0392。根据批次分析证书示例，该产品以冻干形式供应，每片菌饼的平均测定值（MAV）因批次而异（示例批次为 7.8×10² CFU/片），传代次数为3代，推荐培养基为 PDA，并附有 MALDI-TOF 鉴定结果及表型描述。

使用注意事项

巴西曲霉 ATCC 16404 虽为BSL-1菌株，但作为丝状真菌，其孢子可通过空气传播，操作时建议在生物安全柜内进行，避免大量孢子吸入。收获孢子时使用含Tween 80的溶液有助于减少气溶胶形成。含菌培养物应经高压灭菌后废弃。

在采购或引用时，需注意“巴西曲霉”与“黑曲霉”的名称差异：部分较早的文献或商业目录仍沿用旧名黑曲霉，但编号 ATCC 16404 指向的是同一菌株。若实验方案中指定“黑曲霉 ATCC 16404”，可直接使用巴西曲霉 ATCC 16404 替代，两者为同一保藏物的不同分类命名。