支原体污染是研究和工业生产中的一个严重而普遍的问题，不仅会影响试验结果的准确性，还会给生物制剂、生物药物和病毒疫苗带来安全隐患。采用适宜的培养基培养仍是目前各国药典进行支原体检查的标准方法之一，培养基的质量是支原体检查的关键因素，而培养基的营养特性或灵敏度需要使用特定的支原体来检查。

一、不同标准对支原体培养基质控微生物的描述

1、USP 63  MYCOPLASMA TESTS 支原体检测

The test is carried out using a sufficient number of both solid and liquid media to ensure growth in the chosen incubation conditions of small numbers（approximately 100 colony-forming units, cfu; or 100 color-changing units, ccu）of Mycoplasmas that may be present in the test article/material……. (使用足够数量的固体培养基和液体培养基进行测试，以确保可能存在于测试物品/材料中小数量的支原体（大约100个菌落形成单位，cfu；或100种变色单位, ccu）在所选的培养条件下能够生长。)

The range of media chosen is shown to have satisfactory nutritive properties for at least the microorganisms shown in Quality Control Test Strain Organisms (below). The nutritive properties of each new batch of medium are verified for the appropriate microorganisms in the list. When testing for Mycoplasmas include in each test at least two known Mycoplasma species or strains (listed in Quality Control Test Strain Organisms) as positive controls……(所选择的培养基应该至少能够对对“质控测试菌株”（下表）中列出的微生物具有令人满意的营养特性。用列表中适当的微生物对每批新培养基的营养特性进行验证。在进行支原体检测时，至少应使用表中的两种支原体作为阳性对照…….)

Carry out the test for nutritive properties for each new batch of medium. Inoculate the chosen media with appropriate test microorganisms; use not more than 100 cfu per plate containing at least 9mL of solid media and per 100-mL container of liquid medium. (对每批新培养基进行营养特性测试。将适当的测试微生物接种到选择的培养基上；在每个装有至少9mL固体培养基的平板和每100mL液体培养基中接种不超过100 cfu的支原体。)

备注： A.laidlawii 莱氏无胆固醇支原体   M.galliseptium 鸡败血支原体

M.fermentans发酵支原体   M.hyorhinis 猪鼻支原体

M.orale口腔支原体     M.pneumoniae 肺炎支原体

M.synoviae 滑液支原体

2、EP 2.6.7 MYCOPLASMA支原体

When testing for mycoplasmas in the product to be examined, at least 1 of the following species will be included as a positive control……(在检查产品中的支原体时，至少应将表中的1种支原体作为阳性对照…….)

（注：基本与USP的措词和过程非常相似，但对于液体培养基，接种40 CFU而不是100 CFU。）

3 中国药典 3301 支原体检查法 第一法 培养法

培养基灵敏度检查

菌种 肺炎支原体（ATCC 15531株）、口腔支原体（ATCC 23714株）

对支原体的cfu数没有要求，而是稀释到不同的稀释度。

（注：对接种菌悬液的浓度、接种体积和培养基的量未做明确规定，理论上讲，接种量和培养基使用量的不确定将无法测定培养基的灵敏度。）

二、即用定量支原体

为了符合USP <63>  和欧洲药典2.6.7，Microbiologics公司推出了即用定量支原体，方

便客户进行支原体培养基的促生长测试。不需要再等待支原体生长的时间，可以直接根据所需浓度稀释后接种在培养基上。该产品由5支0.5 mL冷冻支原体悬液组成，每支可提供10,000-99,000 CFU / mL（E4）的支原体浓度。

菌株信息

使用图示

注意事项

1、每个小瓶只供一次性使用；

2、如果将悬液解冻再冷冻，将无法保证产品的特性；

3、挑战测试需要在30分钟内完成；

4、在Microbiologics实验室中使用RemelSP4葡萄糖琼脂培养时，该支原体悬液的含量为

1 -9.9×10⁴ CFU / mL。使用不同品牌的培养基获得的浓度将会有差异；

5、储存在-80°C±-10°C的冰箱中。

总结

支原体是一种研究和工业生产中常见的污染微生物，生物制品一旦污染支原体，会引起质量下降，免疫效果得不到保证，因此在研究和工业生产中，不仅需要严格保持无菌操作，还应建立快速有效的支原体检查方法。使用即用定量支原体进行支原体培养基性能的检查，可以提高支原体检查的效率，同时也可以加强支原体检查的标准化。