在工业领域，常压下的汽化过氧化氢（VHP）会应用在洁净灌装线的灭菌中。而在医院里，预真空状态的VHP主要用于内窥镜以及对高温蒸汽敏感器械的灭菌。蒸汽灭菌、干热灭菌和环氧乙烷（EtO）灭菌作为较为成熟的灭菌技术有着几十年的历史了。相比之下，VHP灭菌则是一种新式的灭菌方法，在近年才被应用于大规模的灭菌中。
1）在一定条件下，VHP可以快速地分解为氧气（O2）和水（H2O）；
2）液态过氧化氢的制备方式简便，因此可以有效地控制成本；
4）VHP灭菌不依赖压力容器，因此可以应用在大面积的灭菌中（如整个房间）。
1）对于VHP来说，芽孢数会影响BI的性能；2）通常作为生物指示剂载体的纤维素材料无法应用于VHP生物指示剂中；3）虽然过氧化氢的使用不受温度和湿度的影响，但目前还没有针对VHP灭菌的技术标准，以确定VHP生物指示剂的D值。
VHP灭菌作为一种新型灭菌方式，并未像蒸汽灭菌、干热灭菌或环氧乙烷灭菌那样被广泛使用，因此人们对影响过氧化氢BI性能的因素认知较少。芽孢数是影响BI性能的关键因素之一，但对于VHP灭菌来说，芽孢数影响的原因和其他灭菌方式是有所不同的。对于蒸汽灭菌、干热灭菌和环氧乙烷灭菌来说，当灭菌条件不变时，无论芽孢数的多少，测量结果发现芽孢的抗性是一致的。例如，当使用芽孢数为106的BI对121℃蒸汽灭菌进行测定，得到的D值为1.8分钟。但将接种了不同数量芽孢（104/105/107）的BI同样在121℃蒸汽灭菌的条件下进行测试，也得到了1.8分钟的D值。这个结论同样适用于干热灭菌、环氧乙烷灭菌以及低温蒸汽灭菌。根据这个实验结果，结合芽孢在外界温度改变时产生的变化具有可预测性，我们不仅可以在含有不同数量芽孢的BI上使用相同的D值，还可以根据不同的灭菌条件计算Z值（从而进一步计算D值）。
然而，上述的结论并不能用在VHP灭菌上。Apex实验室（Apex，NC）在生产货号为LOG-456的产品时发现，芽孢在载体上的抗性会随着芽孢数的增加或减少而产生改变。LOG-456产品共包含三种过氧化氢BI，它们分别接种了104/105/106的芽孢，并且被密封在独立的包装里。表1和表2显示了在Bozeman, MT以及 Apex,NC实验室里生产的LOG-456产品的D值（共9个批次）。从表中可以发现，随着芽孢数的减少，BI的D值也会降低。出现这种现象的原因是：由于VHP杀灭芽孢不是一个渗透过程，因此芽孢在载体上的位置越紧密，过氧化氢对芽孢的直接接触就越少。随着芽孢浓度的增加，芽孢之间互相紧挨的可能性就越大，也就导致了VHP更难以接触到芽孢表面。
芽孢之间互相接触或者芽孢在载体表面堆积是不可避免的。这些情况会出现在光滑的二维载体上（如不锈钢片）。不锈钢片表面的凹凸会使得接种区域的边缘产生环效应。但是，相较于有角度的二维载体（Apex不锈钢片），平面载体（Apex芽孢条）形成的环效应会导致更大的问题。
当使用玻璃纤维等三维载体时，芽孢悬液会渗透到载体的内部，然后从载体的纤维中被过滤，此时芽孢就会产生聚集。这种情况同样也会出现在纸质载体中。
当使用蒸汽灭菌、环氧乙烷灭菌和干热灭菌时，灭菌剂可以很容易地渗透到载体内部并接触到芽孢聚集体中。VHP虽然可以穿透载体的内部，但是却不能穿透芽孢聚集体。为了解决这个问题提出了以下两种方法：1）使用更长的灭菌周期以及更强力的灭菌条件，使得VHP可以穿透芽孢聚集体；2）使用芽孢数更少的BI（104或105），更少的芽孢就意味着芽孢堆积或者聚集的可能性减小，因此芽孢就更容易被杀灭。
客户应该充分运行灭菌程序，便于相对轻松地杀灭BI中的芽孢。并且，由于芽孢堆积密度的降低，目前已报道的“流氓BI”出现的概率也大大降低。实际上，由于许多VHP灭菌隔离器几乎每天都在运行，并且所有进入隔离器的物品都会进行灭菌操作，因此引入大量污染物的可能性很小。总之，在这些环境中使用低芽孢数的BI进行灭菌验证是有必要的。
VHP灭菌过程中另一个决定性因素是过氧化氢的浓度。目前，蒸汽灭菌、干热灭菌以及环氧乙烷灭菌工艺已经形成了各自的技术标准。对于蒸汽灭菌来说，标准条件为：121℃饱和蒸汽。对于环氧乙烷灭菌而言，标准条件为：环氧乙烷浓度600 mg/L，温度54℃，湿度为60%。然而VHP灭菌却没有一个技术标准。
化学灭菌剂环氧乙烷的性能会受到灭菌期间相对湿度和温度的影响。我们观察到，同一灭菌剂在相同温度条件下，如果在灭菌期间相对湿度较低，会使得芽孢难以被杀死。灭菌期间的温度也会影响D值，因为ISO 11138-2:2006规定，如果灭菌时的温度不同，环氧乙烷灭菌的D值可能会有两个不同的范围。此外，在我们的实验室测试二氧化氯BI时，我们确定灭菌期间的温度和相对湿度都会影响BI性能。结果表明，温度和湿度会影响化学灭菌剂的效果，因此VHP的灭菌效果也可能受到这些参数的影响。
此外，影响VHP灭菌性能的其他因素有：不同隔离器之间的蒸汽或气流速率的变化、不同隔离器之间的湍流的变化、不同隔离器之间的温度和湿度的变化。同样，指导文件中没有规定BI性能的标准条件，ISO 18472:2006第4.8节仅详细说明了过氧化物生物指示剂D值测定仪器的要求。
使用多个平行BI评估汽化过氧化氢灭菌程序
